Векторы
Стратегия картирования основывается на анализе случайно отобранных клонов. Совершенно ясно поэтому, что при картировании необходимо иметь как можно более обширную библиотеку клонов. Желательно также, чтобы размер клонированных вставок позволял их использовать в дальнейшем в биохимической генетике.
Первоначально мы выбрали для экспериментов космиды из-за сравнительно крупных размеров акцептируемой ДНК. С тех пор как более 10 лет назад Коллинс и Хон ввели в практику первый космидный вектор, было сконструировано большое количество новых векторов такого рода. Среди них используемый в картировании Caenorhabdltis, векторы серии Lorist, разработанные Литлом и Кроссом. Последние два имеют интересные структурные особенности, в частности наличие постоянного числа копий и, что еще более важно для описываемых здесь методов, присутствие элементов, увеличивающих представительность клональных библиотек: терминаторов транскрипции, предотвращающих влияние векторных генов, возможное при транскрипции клонированных вставок. Эти векторы содержат также промоторные последовательности фагов SP6 и Т7, облегчающие считывание. Методы конструирования, расщепления и дефосфорилирования векторных ДНК описаны Маниатисом.
Я2001 – единственный Я-вектор, использованный при картировании Caenorhabditis. И хотя в этом случае вставка составляет только половину последовательности космидной вставки, клоны оказываются более стабильными. Наконец, для некоторых областей генома отмечено более полное представительство именно в А-библиотеке.
Недавно был получен вектор, с помощью которого можно конструировать искусственные дрожжевые хромосомы. Это открытие сулит переворот в картировании: появляется возможность клонировать фрагменты ДНК, на порядок превышающие по размерам космидные вставки. Вероятно также, что соответствующие геномные библиотеки окажутся более представительными. Метод «отпечатков пальцев» пока пригоден лишь для маленьких YAC, но, используя гибридизацию, можно будет присоединять к космидам и большие фрагменты. Скорее всего, в будущем для картирования генома будет применяться техника подбора пар, специально разработанная для YAC.
Другие статьи:
Пептидилдипептидаза А
Ангиотензинпревращающий фермент (АПФ, дипептидил-карбоксипептидаза A, кининаза II, карбоксикатепсин, пептидилдипептидаза А, КФ 3.4.15.1) обладает пептидилдипептидазной и слабыми трипептидилкарбоксипептидазной и эндопептидазной активностям ...
Репликация
Образование РНК-содержащих вирусов происходит путем репликации их РНК, тогда как все клеточные РНК образуются в результате транскрипции ДНК. Здесь мы рассмотрим лишь процесс репликации вирусной РНК как таковой, не касаясь связи репликации ...
Разрушение грибами нефтепродуктов
В последние десятилетия в связи с возродившимся интересом к процессам микробного превращения углеводородов были обнаружены мицелиальные грибы, деятельность которых приводит к деструкции нефти и ее производных. В настоящее время доказано, ...