Два метода изучения липидного полиморфизмаСтраница 1
Кроме метода дифракции рентгеновских лучей для характеристики свойств липидных фаз использовали и другие методы. Один из них, оказавшийся особенно полезным, — это электронная микроскопия замороженных сколов. Второй метод, 31Р-ЯМР, был введен в исследовательскую практику несколько позже и нашел применение для обнаружения небислойных структур, которые, как полагают, играют особую роль в биологических мембранах.
1. Электронная микроскопия липидных фаз с применением метода замораживания—травления. Этот метод оказался очень полезным при изучении структурной организации различных липидных фаз. Примеры получаемых при этом электронных микрофотографий приведены на рис. 2.7. Жидкокристаллическая фаза на этих микрофотографиях всегда выглядит как гладкая поверхность, а Р^.-фаза — как рифленая. Геле-вая фаза выглядит как гладкая поверхность, но при определенных условиях приготовления препарата имеет спиральную текстуру из-за возникновения случайных дефектов в плотной упаковке. Гексагональная фаза, образуемая такими лип идами, как ненасыщенный фосфатидилхолин, выяляется на микрофотографиях после замораживания—травления как стопка цилиндров. При приготовлении образцов липиды уравновешивают в условиях, подходящих для формирования нужных структур, а затем быстро замораживают, чтобы организация этих структур не успела измениться.
Электронно-микроскопические методы использовались также для изучения «липидных частиц». Эти частицы нередко наблюдаются в бинарных смесях, если один из липидов склонен образовывать фазу Ни, а другой — бислойные структуры. Липидные частицы образуются в чисто липидных образцах и потому отличаются от «белковых частиц», которые наблюдаются в биологических мембранах и в реконструированных белково-липид-ных системах. Было высказано предположение, что липидные частицы представляют собой вывернутые мицеллы, расположенные внутри бислоя, и что они играют определенную роль в биологических процессах, облегчая слияние мембран или стабилизируя их на сильно искривленных участках, как, например, в мем^ бране тилакоидов. Однако четких доказательств биологической роли липидных частиц пока не получено.
2. Исследование бислоев методом пР-ЯМР. Этот метод также используется для структурной характеристики гидратирован-ных липидов. Например, фосфолипиды в гексагональной фазе Ни дают спектры 31Р-ЯМР, резко отличающиеся от спектров фосфолипидов в ламеллярной фазе. С помощью этого метода исследовался переход ламеллярной фазы в гексагональную в липидах и липидных смесях. Недостатком метода является некоторая неопределенность при интерпретации спектров в случае изотропного усреднения за счет относительно быстрых движений. Полагают, что такой спектр отвечает структурам типа «липидных частиц», однако это объяснение не является единственно возможным. Как было показано, метод 31Р-ЯМР позволяет надежно установить наличие гексагональной Ни-фазы в чисто липидных дисперсиях, но в случае биологических мембран к подобным выводам следует относиться с осторожностью, особенно если они не подтверждены другими методами.
Другие статьи:
Групповой отбор
Групповой отбор часто называют также групповым отбором, представляет собой дифференциальное размножение разных локальных популяций. В.Райт сравнивает популяционные системы двух типов — большую непрерывную популяцию и ряд мелких полуизолир ...
Неменделевская генетика.
Гениальность законов Менделя заключается в их простоте. Строгая и элегантная модель, построенная на основе этих законов, служила генетикам точкой отчета на протяжении многих лет. Однако в ходе дальнейших исследований выяснилось, что закон ...
Физиология крови
Кровь, лимфа, тканевая, спинномозговая, плевральная, суставная и другие жидкости образуют внутреннюю среду организма. Внутренняя среда отличается относительным постоянством своего состава и физико-химических свойств, что создает оптимальн ...