BioXplorer

Соединение фрагментов с вектором

Предлагаемый метод пригоден для лигирования частичных гидролизатов Sau3Al в вектор Lorist2.

1. Добавьте вместе 1 мкл BamHI-обработанного де-фосфорилированного Lorist2; 2 мкл приготовленных 5аиЗА1-фрагментов; 2 мкл 10 X лигазного буферного раствора; 2 мкл 10 мМ АТР, рН 7,4; 2 мкл 0,1 М дитиотрей-тола; 10 мкл воды и 1 мкл лигазы. Для достижения максимально возможного лигирования поместите смесь в закрытый капилляр.

2. Инкубируйте 16 ч при 14°С.

3. Осторожно упакуйте, руководствуясь соответствующей методикой.

4. Храните библиотеку при 4°С под хлороформом.

5. Разведите 5 мкл упакованной библиотеки в 0,1 мл раствора для разведения.

Добавьте 0,2 мл стационарной культуры клеток. Мы используем для этих целей линию 1046. Ее следует регулярно пересевать через отдельные колонии, контролируя признак reck.

Инкубируйте 20 мин при 37°С. Добавьте 0,5 мл раствора CY и проинкубируйте дополнительно 50 мин. Высейте разные объемы на чашки с канамицином. Ожидаемый выход – 105–106 рекомбинантов на 1 мкг вставочной ДНК.

Другие статьи:

Фунгициды для Penicillium и Aspergillus
Рассмотрим наиболее активные по отношению к пенициллам и аспергилам фунгициды. Неорганические фунгициды. К эффективным неорганическим фунгицидам относятся, в частности, уранилнитрат и сулема. Эти соединения были очень активны при защите ...

Повреждение сосуда
I стадия: предшественник тромбопластина + Са2+ + факторы плазмы → тромбопластин. II стадия: тромбопластин + Ca2+ + протромбин → тромбин. III стадия: тромбин + фибриноген → фибрин Выпущенная из сосудов кровь начинает с ...

Найди семь отличий
Или хотя бы одно. Ведь чтобы реализовать право выбора, нужно обладать информацией. Как отличить трансгенные продукты покупателю? К сожалению, на вкус и цвет - никак. Выяснить, содержит ли продукт измененный ген, можно только с помощью сло ...