Метод генетического нокаута
Нокаут гена – это молекулярно-генетический метод, в ходе которого задуманные исследователем изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь является наиболее адекватным модельным животным для использования технологии инактивации генов. Это обусловлено следующими причинами:
а) мышь – хорошо изученный и доступный объект;
б) геном мыши и человека содержит приблизительно одинаковое число генов;
в) сходство аминокислотных последовательностей всех белков человека и мыши составляет около 90%.
Однако основной причиной использования мыши в качестве модели для инактивации гена является возможность изолирования эмбриональных стволовых клеток, в которых любой ген может быть модифицирован [29]. Клеточные линии, содержащие модифицированный ген, могут быть привнесены в развивающийся зародыш, что позволяет получить химерное животное, несущее искусственно созданную мутацию (рис. 1).
Рис. 1. Стратегия получения линии нокаутированных мышей [5].
Молекулярно-генетическим механизмом, позволяющим осуществлять инактивацию гена, является гомологичная рекомбинация между экзогенной ДНК, несущей задуманные исследователем изменения, и геномной ДНК объекта.
Классическая схема получения нокаутированных мышей включает несколько этапов: получение векторной конструкции, с последующим внесением ее в культуру эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и отбор трансформантов. Трансформированные ЭСК вносят в зародыш, и полученных химерных животных скрещивают для получения линии мышей, гомозиготных по полученной мутации (см. рис. 1).
Другие статьи:
Строение грибной клетки представлена на рисунке №1
Клеточная стенка
Плазмалемма
Ломасома
Ядерная мембрана
Поры в ядерной мембране
Жировые включения
Эндоплазматический ретикулум
Митохондрии
Рис .1. Грибная клетка
Грибы - это и разрушители древесины, и источники лекарственн ...
Внешнее описание журавля
Журавль японский, или уссурийский (Grus japonensis) Семейство Журавли (Gruidae). Японского журавля нередко называют самым красивым из журавлей. Основная окраска его оперения снежно-белая, с бархатно-черными головой и шеей и черными второс ...
Размножение и развитие
Наиболее раннее наступление половой зрелости свойственно рыбам прибрежной группы (с 22-24 см и 4-6 лет), наиболее позднее – придонно-глубоководной (32-34 см и 11-15 лет). Пелагический омуль занимает промежуточное положение, но является са ...