Метод генетического нокаута
Нокаут гена – это молекулярно-генетический метод, в ходе которого задуманные исследователем изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь является наиболее адекватным модельным животным для использования технологии инактивации генов. Это обусловлено следующими причинами:
а) мышь – хорошо изученный и доступный объект;
б) геном мыши и человека содержит приблизительно одинаковое число генов;
в) сходство аминокислотных последовательностей всех белков человека и мыши составляет около 90%.
Однако основной причиной использования мыши в качестве модели для инактивации гена является возможность изолирования эмбриональных стволовых клеток, в которых любой ген может быть модифицирован [29]. Клеточные линии, содержащие модифицированный ген, могут быть привнесены в развивающийся зародыш, что позволяет получить химерное животное, несущее искусственно созданную мутацию (рис. 1).
Рис. 1. Стратегия получения линии нокаутированных мышей [5].
Молекулярно-генетическим механизмом, позволяющим осуществлять инактивацию гена, является гомологичная рекомбинация между экзогенной ДНК, несущей задуманные исследователем изменения, и геномной ДНК объекта.
Классическая схема получения нокаутированных мышей включает несколько этапов: получение векторной конструкции, с последующим внесением ее в культуру эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и отбор трансформантов. Трансформированные ЭСК вносят в зародыш, и полученных химерных животных скрещивают для получения линии мышей, гомозиготных по полученной мутации (см. рис. 1).
Другие статьи:
Тест для выявления белка в моче
Проба с сульфосалициловой кислотой. Мочу для исследования дети собирают в чистую баночку непосредственно перед обследованием в школьном медицинском кабинете за ширмой или расположенной поблизости от медицинского кабинета туалета.
Ход опр ...
Вступление
С первых дней возникновения генетики как науки, ученые мечтали получать направленные мутации, затрагивающие гены изучаемых ими признаков. Первым шагом к осуществлению этой мечты было открытие радиационного и химического мутагенеза. Оконча ...
Аппендицит
Аппендицит- воспаление червеобразного отростка (аппендикса) слепой кишки
Кишечник человека обильно населяют разнообразные микроорганизмы, не вызывая в нем каких- либо болезненных изменений,- так названные сапрофиты. Но при определенных у ...