Метод генетического нокаута
Нокаут гена – это молекулярно-генетический метод, в ходе которого задуманные исследователем изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь является наиболее адекватным модельным животным для использования технологии инактивации генов. Это обусловлено следующими причинами:
а) мышь – хорошо изученный и доступный объект;
б) геном мыши и человека содержит приблизительно одинаковое число генов;
в) сходство аминокислотных последовательностей всех белков человека и мыши составляет около 90%.
Однако основной причиной использования мыши в качестве модели для инактивации гена является возможность изолирования эмбриональных стволовых клеток, в которых любой ген может быть модифицирован [29]. Клеточные линии, содержащие модифицированный ген, могут быть привнесены в развивающийся зародыш, что позволяет получить химерное животное, несущее искусственно созданную мутацию (рис. 1).
Рис. 1. Стратегия получения линии нокаутированных мышей [5].
Молекулярно-генетическим механизмом, позволяющим осуществлять инактивацию гена, является гомологичная рекомбинация между экзогенной ДНК, несущей задуманные исследователем изменения, и геномной ДНК объекта.
Классическая схема получения нокаутированных мышей включает несколько этапов: получение векторной конструкции, с последующим внесением ее в культуру эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и отбор трансформантов. Трансформированные ЭСК вносят в зародыш, и полученных химерных животных скрещивают для получения линии мышей, гомозиготных по полученной мутации (см. рис. 1).
Другие статьи:
Темперамент
Совсем не случайно именно с изучения темпераментальных признаков начинается история систематического познания природы человеческой индивидуальности. Телесные, или конституциональные, особенности человека привлекали внимание врачей и учены ...
Рыбоводство. Промышленное
Рыбоводство – отрасль народного хозяйства, имеющая несколько направлений своего развития: прудовое, озерное или в водохранилищах, морское, в теплых водах ТЭЦ, а также рыборазведение в биопрудах, бассейнах.
Прудовое рыбоводство – одна и ...
Калина обыкновенная (Viburnuv opulus L.)
Родовое название растения viburnum - от "viere" - вить, плести; "opulus" - древнее латинское название одного из видов клена - из-за сходства с его листьями [16].
Ветвистый кустарник или небольшое дерево семейства жимо ...