Метод генетического нокаута
Нокаут гена – это молекулярно-генетический метод, в ходе которого задуманные исследователем изменения вносятся в нуклеотидную последовательность изучаемого гена или его регуляторных элементов. Мышь является наиболее адекватным модельным животным для использования технологии инактивации генов. Это обусловлено следующими причинами:
а) мышь – хорошо изученный и доступный объект;
б) геном мыши и человека содержит приблизительно одинаковое число генов;
в) сходство аминокислотных последовательностей всех белков человека и мыши составляет около 90%.
Однако основной причиной использования мыши в качестве модели для инактивации гена является возможность изолирования эмбриональных стволовых клеток, в которых любой ген может быть модифицирован [29]. Клеточные линии, содержащие модифицированный ген, могут быть привнесены в развивающийся зародыш, что позволяет получить химерное животное, несущее искусственно созданную мутацию (рис. 1).
Рис. 1. Стратегия получения линии нокаутированных мышей [5].
Молекулярно-генетическим механизмом, позволяющим осуществлять инактивацию гена, является гомологичная рекомбинация между экзогенной ДНК, несущей задуманные исследователем изменения, и геномной ДНК объекта.
Классическая схема получения нокаутированных мышей включает несколько этапов: получение векторной конструкции, с последующим внесением ее в культуру эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) и отбор трансформантов. Трансформированные ЭСК вносят в зародыш, и полученных химерных животных скрещивают для получения линии мышей, гомозиготных по полученной мутации (см. рис. 1).
Другие статьи:
Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных
с хроническим рецидивирующим фурункулезом
Результаты исследования уровня гамма-интерферона в сыворотке крови у больных с хроническим рецидивирующим фурункулезом приведены на рис. 9 и табл. 1 (Приложение 1).
Полученные результаты показали‚ что изменения уровня ИФНγ как у бол ...
Репарация путем прямого восстановления исходной
структуры
Под действием алкилирующих агентов, например N-метил-гТГ-нитрозомочевины или Ч^гЧ-диметилнитрозогуанидина, в ДНК образуются О6-метил - или О6-алкилзамещенные гуаниновые остатки. Такие модифицированные остатки гуанина могут деалкилироватьс ...
Лицо
Среди морфологических асимметрий лица отклонение носа вправо выражено у правшей и влево - у левшей; правая половина лица у большинства людей больше левой. В криминалистике есть понятие "биологической диссимметрии лица (головы)": ...