Сыворотку крови (40 мкл) смешивали с 20 мкл 35 мкМ СоSO4 в 100 мМ трис-НСl буфере, рН=7,6,и преинкубировали 8 мин при 37°С. Реакцию начинали прибавлением 10 мкл кбз-Gly-Arg в вышеуказанном буфере. Через 120 мин реакцию останавливали прибавлением 30 мкл 10% трихлоруксусной кислоты. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. Отбирали 50 мкл надосадочной жидкости и определяли количество образовавшегося Arg нингидриновым методом (добавляли 1 мл нингидрина). Далее инкубация 12 мин на кипящей водяной бане. Затем пробы колориметрировали на КФК-2 при λ=590 нм. Активность КПN определяли по отщеплению Arg от кбз-Gly-Arg как Со²+- активируемую. Активность фермента выражали в нмоль Arg, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Количество белка в пробах определяли по методу Лоури.


Другие статьи:

Методика расчета биоритмов
Для расчета собственных биоритмов следует определить количество прожитых дней на определенную дату, начиная со дня рождения. Потом общую численность прожитых дней надо поделить на продолжительность периодов физического, эмоционального и и ...

Место человека в системе животного мира
Общие принципы строения организма человека заложены в период, когда сформировался генетический код и возникла первая клетка, т.е. миллиарды лет назад. В генах человека содержится часть генофонда древних рыб, первых хордовых, беспозвоночны ...

Распределение и видовой состав врановых птиц на территории г. Гомеля. Видовой состав врановых птиц на исследуемой территории
За весь период исследования нами было учтено 5377 из них 1255 птиц относящихся к семейству врановых и 4122 птицы относящихся к иным семействам. При анализе видового состава птиц на исследуемой территории нами были выявлены следующие закон ...