BioXplorer

Для измерения вращательной диффузии молекул давно используется метод деполяризации флуоресценции. Вращение некоторых зондов в мембранах часто сравнивают с их вращением в маслах с известной вязкостью, при этом пользуются понятием «микровязкость», которую измеряют в пуазах. Термин «микровязкость» означает, что зонд «чувствует» величину вязкости только в своем непосредственном окружении, т. е. этот параметр не является макроскопическим. С точки зрения молекулярного движения подобные измерения не имеют строгого количественного смысла, но, как и в случае со спиновыми метками, полученные результаты позволяют создать ценную качественную картину.

В табл. 1 приведены структурные формулы некоторых зондов, используемых при измерении текучести мембран. Чаще всего применяют ДФГ, поскольку он с легкостью накапливается в мембранах, обладает интенсивной флуоресценцией, по-видимому, не связывается с белками и чувствителен к физическому состоянию мембран. Однако временные измерения свидетельствуют о некой гетерогенности неизвестной природы; кроме того, имеются разногласия по поводу ориентации зонда в бислое и характера его подвижности.

Рис. 4 иллюстрирует принципы, лежащие в основе применения флуоресценции и фосфоресценции для анализа вращения молекул. Молекула, поглотившая фотон, за время 10" 11 с переходит в возбужденное синглетное состояние Si. Термин «синглетное» указывает на то, что спин электрона при поглощении фотона не изменяется. Обычно возвращение в основное, невозбужденное состояние происходит за время - 10"8 с. Причинами такого перехода являются столкновение с соседними молекулами, диссипация энергии в виде тепла или испускание фотона. Характерное время перехода популяции молекул из синглетного возбужденного состояния в основное равно тт. Некоторые молекулы с большой вероятностью переходят из синглетного возбужденного состояния в триплетное, и этот переход сопровождается изменением спина электрона. Испускание фотона при переходе молекулы из этого состояния в основное называется фосфоресценцией. Время жизни молекулы в триплетном состоянии относительно велико, что связано с изменением спинового состояния электрона при испускании фотона.

Рассмотрим принцип метода деполяризации. Свет, поляризованный вдоль оси z, будет предпочтительно возбуждать молекулы, у которых дипольный момент перехода имеет такую же ориентацию. Вероятность возбуждения пропорциональна cos2 в, где в — угол между дипольиым моментом перехода и вектором напряженности электрического поля. Такая же зависимость от cos2 в имеет место и для процесса испускания фотона, поэтому молекула, у которой дипольный момент перехода ориентирован вдоль оси z, будет испускать свет с такой же поляризацией.

Испускаемый свет анализируют с помощью поляризаторов, определяя интенсивность компоненты, параллельной и перпендикулярной направлению поляризации возбуждающего света.

Анизотропия г связана с /, и IL следующим образом:

Если между моментами поглощения и испускания света молекула не вращается, то /, будет больше, чем 1±, и г будет иметь максимальное значение 0.4. Если же молекулы, находясь в возбужденном состоянии, совершают интенсивные изотропные вращательные движения, то г будет равно нулю, поскольку в среднем молекулы к моменту испускания света будут ориентированы беспорядочно. При тк = tf величина г будет зависеть от характера движения. При этом т ~ 1 и ту ' отражают скорости вращения и испускания света.

Другие статьи:

Стране нужны тонны витаминов
Немногим больше сорока лет назад началось промышленное приготовление витаминов в нашей стране. Их ежегодная продукция теперь составляет тонны. Витамин С получают из плодов шиповника, облепихи. Из моркови и тыквы — витамин А. Печень кита, ...

Почти фантастика
Возможности генной инженерии практически безграничны. При желании можно создать совершенно фантастические продукты, начиная от внешнего вида, заканчивая самыми необычными свойствами. Например, молоко, дольше не прокисающее при повышенной ...

Биологическая характеристика рыбца в связи со средой его обитания и образом жизни. Общая биология вида
Надкласс: Бесчелюстные (Gnathostomata). Ряд: Рыбы (Pisces). Класс: Костные рыбы (Osteichthyes). Подкласс: Лучепёрые (Actinopterygii). Надотряд: Костистые рыбы (Teleostei). Отряд: Карпообразные (Cypriniformes). Подотряд: Карповидные ...