Флуоресцентные зонды, используемые для
измерения текучести мембранСтраница 2
Для того чтобы разграничить динамические эффекты и эффекты, связанные с ограничениями, налагаемыми на диапазон допустимых движений, определяют временную зависимость анизотропии r света, испускаемого молекулой после возбуждения. Значение г в данный момент времени отражает степень разу-порядочивания молекул относительно вектора поляризации за вре- ■ мя, прошедшее после поглощения возбуждающего импульса света. Спад r от максимального значения го задается выражением
тк — время вращательной корреляции, оно определяется скоростью затухания. Если при / оо все молекулы окажутся беспорядочно ориентированными, то л в пределе будет равно нулю. Однако если движение молекул ограничено, то их ориентация никогда не будет совершенно случайной. В такой ситуации г» не будет равно нулю, и с помощью этого параметра можно определить степень ограничения, которое налагается на подвижность зонда его окружением. Параметр упорядоченности определяется из этих величин так же, как в случае ЭПР или ЯМР:
К сожалению, такие кинетические измерения проводятся редко, большинство экспериментов выполнено в стационарном режиме при непрерывном возбуждении и испускании. Значение г, полученное таким способом, носит усредненный характер и определяется как
Рассмотрим следующие три случая.
1. Очень быстрое движение: 7"= г„, предельному значению.
2. Очень медленное движение или его отсутствие: г = го, максимальному значению.
3. Случаи, представляющие практический интерес '- 7 зависит как от скорости движений, так и от ограничений, налагаемых на них.
Без соответствующей корректировки определение микровязкости по результатам измерений 7 не будет сводиться к простым динамическим измерениям.
Вязкость бислоя весьма высока, поэтому время вращательной корреляции небольших флуоресцентных и ЭПР-зондов составляет 10~8—10 с. В воде, имеющей вязкость 0,01 пуаз, молекулы такого размера вращались бы по крайней мере в 100 раз быстрее. Мембранные белки имеют значительно большие размеры, чем упомянутые метки, и поэтому вращаются гораздо медленнее. Чтобы метки, «пришитые» к этим белкам, были чувствительны к их вращению, время жизни меток в возбужденном состоянии должно составлять порядка 10~3 с.
Другие статьи:
Характеристика семейства Лютиковые. Нарисуйте разные типы цветков и плодов.
Формулы цветков. Укажите представителей 15 видов и их практическое значение
Лютиковые преимущественно травянистые растения, иногда лианы. Листья очередные, реже супротивные. Цветки (у первичных родов примитивного типа) правильные и неправильные, спирально-циклические, одиночные или в малоцветковых соцветиях. Опыл ...
Собственные наблюдения
Наблюдение проводили в Худинском охотничьем хозяйстве Благовещенского района, для обследования выбрали озеро Ряшкино (см. приложение В).
Пойменное притеррасное озеро. На левом берегу расположен Муравьёвский заказник, на его территории на ...
Особенности экологии семейства «богомоловые»
Богомолы (Mantodea) – особый отряд насекомых. По ряду особенностей (строение брюшка, крыльев, выработка особых капсул-оотек для яиц) они схожи с тараканами – по этим признакам их иногда даже объединяли в один отряд. Но по образу жизни и п ...