Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови
Страница 1

Информация » Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями » Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови

Для определения уровня ИЛ-4 использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа‚ с использованием набора реактивов "ИФА-IL-4" фирмы ВЕКТОР-БЕСТ. Набор "ИФА-IL-4" предназначен для определения концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови в клинических, диагностических и научно-исследовательских лабораториях.

Состав набора:

■ комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов с рамкой с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к интерлейкину-4, маркирован "Стрипы с моноклональными антителами";

■ 7 калибровочных проб, содержащих известные количества интерлейкина-4 – 0; 12,5; 25; 50; 100; 200 и 400пг\мл, лиофилизованные препараты;

■ аналитический буферный раствор, маркирован "Буфер А", 1 флакон;

■ концентрированный раствор антител анти-IL-4-биотин, маркирован "Антитела", 1 флакон;

■ концентрированный раствор конъюгата авидин-пероксидаза, маркирован "Конъюгат Е", 1 флакон;

■ концентрированный буферный раствор для промывок лунок, маркирован "Буфер Р", 1 флакон;

■ субстратный буфер, маркирован "Буфер С", 1 флакон;

■ 10% кислота, маркирована "Стоп-реагент", 1 флакон;

■ раствор тетраметилбензидина, маркирован " ТМБ";

Дополнительные материалы и оборудование:

■ автоматические одноканальные пипетки с изменяемым объемом отбора жидкостей: от 0,005 до 0,01 мл; от 0,05 до 0,25 мл; от 0,2 до 1 мл; от 1 до 5 мл;

■ одноканальная полуавтоматическая пипетка, позволяющая отбирать объемы жидкости до 0,3 мл.

■ прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебания 3-4мм и частотой 4-6 Гц при комнатной температуре (+16-25°С), либо статируемый шейкер, позволяющий производить встряхивание в том же режиме при температуре +37°С;

■ спектрофотометр, позволяющий измерить оптическую плотность раствора в стрипах при длине волны 450нм;

■ цилиндры, позволяющие отмерять 10 и 100 мл;

■ два стеклянных стакана емкостью 20 мл и один - 150 мл;

■ дистиллированная вода.

Принцип работы набора.

В наборе "ИФА-IL-4" использован "сэндвич" вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к интерлейкину-4. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с биотином. На первой стадии анализа IL-4, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный IL-4 взаимодействует с конъюгатом вторых антител – биотин. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IL-4 в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу.

Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация IL-4 в определяемых образцах.

Подготовка реагентов к анализу

· Калибровочные пробы. Во флаконы с калибровочными пробами добавить по 1,0 мл дистиллированной воды, выдержать в течение 20мин. И затем тщательно перемешать до полного растворения, избегая пенообразования. Хранить при температуре +4 .6° С в течение трех суток; при возможности более длительного хранения разлить по 220 мкл (чтобы избежать повторного оседания) и хранить при температуре -20° С не более месяца.

Страницы: 1 2 3


Другие статьи:

Расчет экономических затрат на использование различных сорбентов относительно Cs-137
По данным ОБЛСЕЛЬХОЗПРОД средняя стоимость одной тонны соломы 20000 – 30000 рублей. Известно, что лактационный период коров составляет 305 дней. Если учесть что корова в день потребляет три килограмма соломы, то 25000 рублей – 1000 килог ...

Жизненный цикл бабочки
Бабочки относятся к насекомым с полным превращением, или голометаморфозом. Их жизненный цикл включает четыре фазы: · Яйцо; · Личинка (гусеница); · Куколка; · Взрослое насекомое (имаго). ...

Нейропептиды - регуляторы памяти
С середины 60-х годов стало известно, что некоторые олигопептиды, представляющие собой молекулы из небольшого числа аминокислотных остатков, способны модифицировать процесс обучения и влиять на степень выработки, хранения и угасания приоб ...