Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови
Страница 1

Информация » Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями » Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови

Для определения уровня ИЛ-4 использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа‚ с использованием набора реактивов "ИФА-IL-4" фирмы ВЕКТОР-БЕСТ. Набор "ИФА-IL-4" предназначен для определения концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови в клинических, диагностических и научно-исследовательских лабораториях.

Состав набора:

■ комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов с рамкой с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к интерлейкину-4, маркирован "Стрипы с моноклональными антителами";

■ 7 калибровочных проб, содержащих известные количества интерлейкина-4 – 0; 12,5; 25; 50; 100; 200 и 400пг\мл, лиофилизованные препараты;

■ аналитический буферный раствор, маркирован "Буфер А", 1 флакон;

■ концентрированный раствор антител анти-IL-4-биотин, маркирован "Антитела", 1 флакон;

■ концентрированный раствор конъюгата авидин-пероксидаза, маркирован "Конъюгат Е", 1 флакон;

■ концентрированный буферный раствор для промывок лунок, маркирован "Буфер Р", 1 флакон;

■ субстратный буфер, маркирован "Буфер С", 1 флакон;

■ 10% кислота, маркирована "Стоп-реагент", 1 флакон;

■ раствор тетраметилбензидина, маркирован " ТМБ";

Дополнительные материалы и оборудование:

■ автоматические одноканальные пипетки с изменяемым объемом отбора жидкостей: от 0,005 до 0,01 мл; от 0,05 до 0,25 мл; от 0,2 до 1 мл; от 1 до 5 мл;

■ одноканальная полуавтоматическая пипетка, позволяющая отбирать объемы жидкости до 0,3 мл.

■ прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебания 3-4мм и частотой 4-6 Гц при комнатной температуре (+16-25°С), либо статируемый шейкер, позволяющий производить встряхивание в том же режиме при температуре +37°С;

■ спектрофотометр, позволяющий измерить оптическую плотность раствора в стрипах при длине волны 450нм;

■ цилиндры, позволяющие отмерять 10 и 100 мл;

■ два стеклянных стакана емкостью 20 мл и один - 150 мл;

■ дистиллированная вода.

Принцип работы набора.

В наборе "ИФА-IL-4" использован "сэндвич" вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к интерлейкину-4. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с биотином. На первой стадии анализа IL-4, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный IL-4 взаимодействует с конъюгатом вторых антител – биотин. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IL-4 в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу.

Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация IL-4 в определяемых образцах.

Подготовка реагентов к анализу

· Калибровочные пробы. Во флаконы с калибровочными пробами добавить по 1,0 мл дистиллированной воды, выдержать в течение 20мин. И затем тщательно перемешать до полного растворения, избегая пенообразования. Хранить при температуре +4 .6° С в течение трех суток; при возможности более длительного хранения разлить по 220 мкл (чтобы избежать повторного оседания) и хранить при температуре -20° С не более месяца.

Страницы: 1 2 3


Другие статьи:

Роль микроорганизмов в круговороте углерода в природе. Углеродное питание прокариот с различными типами жизни
Круговорот углерода складывается из двух взаимосвязанных процессов: 1) потребление углекислоты атмосферного воздуха аутотрофными микробами; 2) возвращения, пополнения запасов углекислоты в атмосфере. Потребление СО2 совершается фотосинтез ...

Рефлекторная теория и ее основные принципы
Положения рефлекторной теории, разработанные И. М. Сеченовым. И. П. Павловым и развитые Н. Е. Введенским. А. А. Ухтомским. В. М. Бехтеревым, П. К. Анохиным и другими физиологами, являются научно-теоретической основой советской физиологии ...

Источники витамина РР
Так как незаменимые жирные кислоты по своим свойствам сходны с витаминами, их относят иногда к жирорастворимым витаминам (витамин F). К витаминам также относят холин и инозит, поскольку они также являются незаменимыми компонентами пищи. О ...