BioXplorer

Для определения уровня ИЛ-4 использовался метод твердофазного иммуноферментного анализа‚ с использованием набора реактивов "ИФА-IL-4" фирмы ВЕКТОР-БЕСТ. Набор "ИФА-IL-4" предназначен для определения концентрации ИЛ-4 в сыворотке крови в клинических, диагностических и научно-исследовательских лабораториях.

Состав набора:

■ комплект из двенадцати восьмилуночных стрипов с рамкой с иммобилизованными на внутренней поверхности лунок моноклональными антителами к интерлейкину-4, маркирован "Стрипы с моноклональными антителами";

■ 7 калибровочных проб, содержащих известные количества интерлейкина-4 – 0; 12,5; 25; 50; 100; 200 и 400пг\мл, лиофилизованные препараты;

■ аналитический буферный раствор, маркирован "Буфер А", 1 флакон;

■ концентрированный раствор антител анти-IL-4-биотин, маркирован "Антитела", 1 флакон;

■ концентрированный раствор конъюгата авидин-пероксидаза, маркирован "Конъюгат Е", 1 флакон;

■ концентрированный буферный раствор для промывок лунок, маркирован "Буфер Р", 1 флакон;

■ субстратный буфер, маркирован "Буфер С", 1 флакон;

■ 10% кислота, маркирована "Стоп-реагент", 1 флакон;

■ раствор тетраметилбензидина, маркирован " ТМБ";

Дополнительные материалы и оборудование:

■ автоматические одноканальные пипетки с изменяемым объемом отбора жидкостей: от 0,005 до 0,01 мл; от 0,05 до 0,25 мл; от 0,2 до 1 мл; от 1 до 5 мл;

■ одноканальная полуавтоматическая пипетка, позволяющая отбирать объемы жидкости до 0,3 мл.

■ прибор для встряхивания рамки со стрипами (шейкер), позволяющий производить встряхивание с амплитудой колебания 3-4мм и частотой 4-6 Гц при комнатной температуре (+16-25°С), либо статируемый шейкер, позволяющий производить встряхивание в том же режиме при температуре +37°С;

■ спектрофотометр, позволяющий измерить оптическую плотность раствора в стрипах при длине волны 450нм;

■ цилиндры, позволяющие отмерять 10 и 100 мл;

■ два стеклянных стакана емкостью 20 мл и один - 150 мл;

■ дистиллированная вода.

Принцип работы набора.

В наборе "ИФА-IL-4" использован "сэндвич" вариант твердофазного иммуноферментного анализа. Для реализации этого варианта использованы два моноклональных антитела с различной эпитопной специфичностью к интерлейкину-4. Одно из них иммобилизовано на твердой фазе (внутренняя поверхность лунок), второе конъюгировано с биотином. На первой стадии анализа IL-4, содержащийся в калибровочных и исследуемых пробах связывается с антителами, иммобилизованными на внутренней поверхности лунок. На второй стадии анализа иммобилизованный IL-4 взаимодействует с конъюгатом вторых антител – биотин. Количество связавшегося конъюгата прямо пропорционально количеству IL-4 в исследуемом образце. На последней стадии анализа в лунки вносят авидин-пероксидазу.

Во время инкубации с субстратной смесью происходит окрашивание раствора в лунках. Степень окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся меченых антител. После измерения оптической плотности раствора в лунках на основании калибровочной кривой рассчитывается концентрация IL-4 в определяемых образцах.

Подготовка реагентов к анализу

· Калибровочные пробы. Во флаконы с калибровочными пробами добавить по 1,0 мл дистиллированной воды, выдержать в течение 20мин. И затем тщательно перемешать до полного растворения, избегая пенообразования. Хранить при температуре +4 .6° С в течение трех суток; при возможности более длительного хранения разлить по 220 мкл (чтобы избежать повторного оседания) и хранить при температуре -20° С не более месяца.

Другие статьи:

Методика расчета биоритмов
Для расчета собственных биоритмов следует определить количество прожитых дней на определенную дату, начиная со дня рождения. Потом общую численность прожитых дней надо поделить на продолжительность периодов физического, эмоционального и и ...

Самоорганизующиеся системы
Сложнодинамические системы часто представляют собой самоорганизующиеся системы. В зависимости от выделения той или иной ведущей группы свойств их также называют саморегулирующимися, самонастраивающимися, самоалгоритмизирующимися система ...

Объекты и методы исследований. Объекты исследований
В качестве объектов исследования были выбраны коллекционные штаммы микромицетов: Aspergillus flavus, A. fumigatus, Alternaria sp., Penicillium sp., Cladosporium sp., Trichoderma sp., Verticillium sp. Культуры были взяты из коллекции культ ...