Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови
Страница 2

Информация » Исследование уровня цитокинов у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями » Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке крови

· Стрипы. Вскрыть и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в герметично закрытом пакете из фольгированного полиэтилена при температуре

· Сывороточный буфер. В стакан с 480 мл дистиллированной воды добавить содержимое флакона с маркировкой"Буфер Р". Тщательно перемешать, избегая пенообразования. Xранить промывочный буфер при температуре +2…8°С.

· Буфер А. Готов к использованию. Хранить закрытым при температуре +2…6° С.

· Набор антител анти-IL-4-биотин. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного раствора антител путем смешивания 40 мкл концентрированного антител с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор антител должен быть использован в течение часа, длительному хрипению не подлежит.

· Конъюгат Е. авидин-пероксидаза. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного раствора конъюгата путем смешивания 40 мкл концентрированного конъюгата Е с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор конъюгата Е должен быть использован в течение часа, длительному хранению не подлежит.

· Субстратная смесь приготовляется непосредственно перед употреблением.

· "Стоп-реагент" готов к использованию.

Проведение анализа:

1

Внести во все лунки по 0,1 мл "Буфер А". Расход реагентов в табл.1

2

В соответствующие лунки по 0,1 мл калибровочных проб или исследуемой сыворотки, внесение образцов не должно занимать более 15 мин

3

Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 2 ч со встряхиванием

4

Удалить содержимое лунок декантированием и промыть лунки три раза. При промывке во все лунки добавить по 0,25 мл промывочного буфера

5

На шейкере в течение 5-10 сек с последующим декантированием. При каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в положении по фильтровальной бумаге

6

Внести во все лунки по 0,1 мл раствора антител

7

Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 1 часа со встряхиванием

8

Лунки промыть

9

Внести во все лунки по 0,1 мл раствора конъюгата Е

10

Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 30 минут со встряхиванием

11

Лунки промыть

12

Перед окраской стрипы сполоснуть дистиллированной водой для более полного удаления не связавшего конъюгата

13

Внести во все лунки по 0,1 мл субстратной смеси и инкубировать стрипы в темноте в течение 15-20 мин в зависимости от степени развития окраски

14

Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и субстратную смесь, по 0,05 мл "Стоп-реагента" для остановки ферментной реакции, встряхивать на шейкере 5мин

15

Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм

16

Построить для калибровочных проб график зависимости оптической плотности в единицах оптической плотности (ОП) от концентрации IL-4 в пг\мл.

17

Определить содержание IL-4 в пробах по калибровочному графику

Страницы: 1 2 3


Другие статьи:

Применение ферроцина
Ферроцин применяют для снижения уровня содержания цезия-137 в молоке и мышечной ткани КРС при содержании их на территории радиоактивного загрязнения. Ферроцин назначают: - в форме болюса, приготовленного из смеси сернокислого бария (75%) ...

Предмет, задачи и методы физиологии растений
Физиология растений — наука, которая изучает процессы жизнедеятельности и функции растительного организма. Слово «физиология» греческого происхождения; оно состоит из двух слов: physis — природа и logos — понятие, учение. Физиология расте ...

Каротиноиды
Это большая группа пигментов желтого, оранжевого и красного цвета. Каротиноиды широко распространены в природе: их обнаружено больше трехсот. Однако в фотосинтезе участвуют лишь некоторые из них. Поглощение света каротиноидами, а следова ...