Метод определения уровня интерлейкина-4 в сыворотке кровиСтраница 2
· Стрипы. Вскрыть и установить на рамку необходимое количество стрипов. Оставшиеся стрипы хранить в герметично закрытом пакете из фольгированного полиэтилена при температуре
· Сывороточный буфер. В стакан с 480 мл дистиллированной воды добавить содержимое флакона с маркировкой"Буфер Р". Тщательно перемешать, избегая пенообразования. Xранить промывочный буфер при температуре +2…8°С.
· Буфер А. Готов к использованию. Хранить закрытым при температуре +2…6° С.
· Набор антител анти-IL-4-биотин. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного раствора антител путем смешивания 40 мкл концентрированного антител с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор антител должен быть использован в течение часа, длительному хрипению не подлежит.
· Конъюгат Е. авидин-пероксидаза. В зависимости от количества используемых стрипов подготовить необходимый объем однократного раствора конъюгата путем смешивания 40 мкл концентрированного конъюгата Е с 1 мл промывочного буфера из расчета на один стрип. Однократный раствор конъюгата Е должен быть использован в течение часа, длительному хранению не подлежит.
· Субстратная смесь приготовляется непосредственно перед употреблением.
· "Стоп-реагент" готов к использованию.
Проведение анализа:
1 |
Внести во все лунки по 0,1 мл "Буфер А". Расход реагентов в табл.1 |
2 |
В соответствующие лунки по 0,1 мл калибровочных проб или исследуемой сыворотки, внесение образцов не должно занимать более 15 мин |
3 |
Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 2 ч со встряхиванием |
4 |
Удалить содержимое лунок декантированием и промыть лунки три раза. При промывке во все лунки добавить по 0,25 мл промывочного буфера |
5 |
На шейкере в течение 5-10 сек с последующим декантированием. При каждом декантировании тщательно удалять остатки жидкости из лунок постукиванием рамки со стрипами в положении по фильтровальной бумаге |
6 |
Внести во все лунки по 0,1 мл раствора антител |
7 |
Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 1 часа со встряхиванием |
8 |
Лунки промыть |
9 |
Внести во все лунки по 0,1 мл раствора конъюгата Е |
10 |
Инкубировать стрипы при температуре 37°С в течение 30 минут со встряхиванием |
11 |
Лунки промыть |
12 |
Перед окраской стрипы сполоснуть дистиллированной водой для более полного удаления не связавшего конъюгата |
13 |
Внести во все лунки по 0,1 мл субстратной смеси и инкубировать стрипы в темноте в течение 15-20 мин в зависимости от степени развития окраски |
14 |
Добавить во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и субстратную смесь, по 0,05 мл "Стоп-реагента" для остановки ферментной реакции, встряхивать на шейкере 5мин |
15 |
Измерить оптическую плотность в лунках при длине волны 450 нм |
16 |
Построить для калибровочных проб график зависимости оптической плотности в единицах оптической плотности (ОП) от концентрации IL-4 в пг\мл. |
17 |
Определить содержание IL-4 в пробах по калибровочному графику |
Другие статьи:
Питание человека
Энергия химических связей веществ пищи — жиров, углеводов и белков и некоторых других — обеспечивает энергетические потребности организма человека.
Современные представления о питании человека нашли отражение в теории. Пища — фактор, обе ...
Медь в растениях
-Выделение меди из клеток корней в соки, где медь находится в подвижных формах, ключевой процесс питания растения медью.
-Концентрация меди в соках коррелирует с концентрациями аминокислот. ...
Селезеночник очереднолистный
Chrysosplenium artenifolum L., семейство Камнеломковые (Saxifragaceae).
Селезеночник начинает цвести сразу же после схода снега. В топких сырых местах, лесах, кустарниках, по берегам рек и ручьев он образует сплошные заросли, желтые от ц ...