BioXplorer

Для определения активности лейцинаминопептидазы 90 мкл сыворотки крови смешивали с 10 мкл раствора пуромицина, приготовленного на соответствующем буфере (в случае опытной пробы (I)) и к 10 мкл 20 мМ фосфатного буфера (рН 7,4) (в случае опытной пробы (II) и контрольной пробы). Далее проводили преинкубацию 8 мин при 37˚С. Реакцию начинали прибавлением в опытные пробы 100 мкл 310 мкМ раствора лей-b-нафтиламина, приготовленного на буфере. Через 30 мин реакцию останавливали прибавлением 40 мкл 10% раствора ТХУ. В контрольные пробы добавляли 100 мкл субстрата. Пробы центрифугировали 30 мин при 4000 об/мин. Отбирали 100 мкл надосадочной жидкости, добавляли по 1,5 мл натрий-ацетатного буфера (рН 4,2). Измерение флюоресценции образовавшегося b-нафтиламина проводили на флюориметре ФМЦ-2 при λex=360 нм и λem=420 нм в кювете толщиной 1 см. Активность фермента определяли как разность между опытной пробой (I) и контрольной пробой и выражали в мкмоль b-нафтиламина, образовавшегося за 1 мин инкубации в пересчете на 1 мг белка. Белок определяли методом Лоури.

Полученные результаты обрабатывали статистически с использованием t-критерия Стьюдента. Полученные отличия в значениях между опытной и контрольной группами считали достоверными при р <0,05.

Другие статьи:

Ноосфера - духовный мир человека
Ноосфе́ра (греч. νόος - "разум" и σφαῖρα - "шар") - сфера взаимодействия общества и природы, в границах которой разумная человеческая деятельность становится опре ...

Основные этапы эволюции европейского естествознания
Физика - основа естественных наук. Всю историю развития физики можно условно разделить на три основных этапа: доклассической физики; классической физики; постклассической физики. Первый этап развития физики - этап доклассической физики - ...

Чистяк весенний
Встречается в то же время года, что и предыдущие эфемероиды. Он цветет по кустарникам, лиственным лесам и лесным опушкам, на низинных лугах и на пойменных землях, богатых гумусом. Чистяк корне-клубневой геофит. За лето вся надземная част ...